临床基因扩增PCR实验室布局建设SI
白癜风该怎么治 https://m.39.net/pf/a_4443995.html一临床基因扩增实验室布局形式：A、功能区呈现分散形式这种实验室往往都是由于场地受限，不得不将各个功能区分散于不同的建筑物或者同一建筑物的不同位置，各功能区之间没有相邻，互不干扰，对于这种的临床基因扩增实验室一般来说没有特定的要求。但由于这种功能间之间的分散性给实验人员带来诸多不便，所以在新建的临床基因扩增实验室往往不采用这种这种形式。B、组合形式临床基因扩增实验室组合形式临床基因扩增实验室是目前最为常见的新增临床基因扩增实验室的建设形式，由于建设所提供的空间比较大，可以将各功能区实验用房能够依次相邻划分，形成一个组合形式完成基因扩增分析的临床基因扩增实验室，各个功能区的实验室在空间分布上各自独立，互不干扰，彼此之间除了传递窗不存在任何交互。但是由于这些功能间都在一个区域范围内，所以对于组合形式临床基因扩增实验室必须提供安全保证的屏障系统，各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。同时也要考虑整个实验室的人流路线、物流路线以及消防路线等，另外也要对实验室的空调通风系统、气流流向、大气压以及装修材料等提出了一定的要求。工作区域及各区域所用的仪器设备必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。各区域实验台表面应可耐受次氯酸钠、双氧水等化学物质及紫外线的消毒清洁作用。临床基因扩增实验室可分为两个大的功能工作区域：核酸扩增前区和核酸扩增后区。核算扩增前区包括试剂准备间和样本制备间，这个两房间各自独立，不能出现空气互通，这两个房间相对外界气压呈正压状态。核酸扩增后区包括扩增区和产物分析区，使用实时荧光临床基因扩增仪、HIV病毒载量测定仪的临床基因扩增实验室，这个两区域可以合并为一个房间。这个区域如果是分开两个房间，这两个房间也必须是各自独立，不能出现空气互通。核算扩增后区对外界气压呈负压状态。临床基因扩增实验室根据使用仪器的功能合理设置各个工作区域，如采用聚合酶联反应：则设置试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区四个单独的工作区域，这是最常用的分区方式。样品需要粉碎处理的，还需增设样品粉碎区；若使用实时荧光临床基因扩增法：基因扩增区、基因产物分析区可以合并在一个房间内；采用标本处理、核酸提取及扩增检测为一体的全自动化临床基因扩增分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并为一个区域，因此临床基因扩增实验室原则上设置五个区或四个区或三个区或二个单独的工作区。核酸扩增前区和核酸扩增后区可设在一个房间内，但必须在满足下列要求的前提下：核酸扩增前区实验室内设置两个不同位置的实验区，试剂配置在超净工作台中操作，样品处理在生物安全柜内操作。在核酸扩增后区使用全封闭的扩增和检测系统，如实时荧光临床基因扩增仪等。每个实验人员使用各自的试剂、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。在实验前后对操作区域和共享器具进行清洁及消毒。各区域的试剂、器具、仪器和设备为该区专用，不得交叉使用。二分区设置（1）试剂储存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，本区应对外界保持微正压。（2）标本制备区该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。（3）扩增反应混合物配制和扩增区该区域主要进行的操作为DNA扩增和扩增片段的测定。此外，已制备的DNA模板(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。三临床基因扩增实验室工作基本原则进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用，最好能用不同颜色的地面作为区别。不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。各区域要有醒目的标示牌，防止出现混乱。（5）实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。（6）工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（nm波长），在工作完成后调至实验台上60～90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》。四临床基因扩增实验室各区域工作注意事项(1)试剂储存和准备区本区的功能为：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。贮存试剂和用于样品制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用。大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。主贮存试剂，应分装冰冻贮存。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。主反应混合液的组成成分尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果必须有书面报告。对于“热启动”技术，聚合酶也可不包含在主反应混合液中。（2）样品粉碎区（根据实际需要增设）本区的功能为：对样品进行粉碎。样品在此区粉碎，转移到样品处理容器并加人适当核酸抽提溶液后，再进入样品制备区。已粉碎好的样品，在此区抽取所需检测用的试样，转移到样品处理容器并加人适当核酸抽提溶液后，再进人样品制备区。将其余样品封存后送回样品制备区。粉碎机要放置在排气的防污染操作台上，每个样品要单独使用已彻底清洗过的器皿。粉碎要在单独的房间进行，并且要远离其他操作区域。（3）样品制备区本区的功能为：待检样品的保存，核酸提取、贮存及其加人至扩增反应管。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法，可在开展检测前对提取方法进行评价。制备好的样品核酸要贮藏在超低温冰箱中。本区可部分或全部设为正压条件。从试剂贮存和准备区拿来的主反应混合液，在此区正压条件下加人待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管，再进人反应扩增区。（4）扩增区本区的功能为：DNA扩增。此外，已制备的DNA模板的加人和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。（5）扩增产物分析区本区的功能为：扩增片段的测定。核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板上探针杂交方法(同位素标记或非同位素标记)、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酞胺凝胶电泳、Southern杂交、核酸测序方法等。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板。本区是最主要的扩增产物污染来源，本区如采用负压条件或减压情况下(如安装排风扇)可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故应当注意实验人员的安全防护。临床基因扩增(PCR)实验室安全注意问题：1)生物安全柜的摆放位置不易摆放在与出入口紧邻的墙体上；2)实验室内的通讯设施应该放置于生物安全柜对面；3)实验室门口位置设置紧急洗眼器和紧急喷淋，以防止实验人员受到伤害；4)高压灭菌器应与传递窗紧邻；5)实验室内的压力显示器和报警装置都应放置在醒目位置；6)与室外联系的电话应放置在醒目位置，并且放置在便于实验室人员快速拿起的位置；7)实验室应该具有防止昆虫和其他动物进入的措施。以上为SICOLAB整理提供，实验室设计、建设、装修、改造、通风、净化、水电气、三废处理，实验室家具设计生产安装一站式。
